[화학및 실험2] 6주차 예비보고서, 비타 500에 들어있는 비타민 C 정량 분석

[실험 제목]
비타 500에 들어있는 비타민 C 정량 분석

비타민C가 많이 들어간 귤 ㅎㅎ

[실험 목적]
DPIP(2,6-dichlorophenolindophenol) 적정 방법을 이용하여 비타 500에 함유되어 있는 비타민 C를 정량 분석한다.

 

[실험 이론]
다음 실험 이론을 조사하시오.

1. 산화- 환원 반응에 대해 설명하시오.

산화·환원 반응(Redox, reduction-oxidation)은 원자의 산화수가 달라지는 화학 반응이다.
산화·환원 반응은 화학종 사이의 실제 또는 형식적인 전자 이동을 특징으로 하며, 가장 흔히 한 종(환원제)은 산화(전자 손실)를 겪고 다른 종(산화제)은 환원(전자 획득)을 겪는다. 전자가 제거된 화학종은 산화된 화학종이라고 하고 전자가 추가된 화학종은 환원된 화학종이라고 한다. 다시 말해서:

산화(Oxidation)는 분자, 원자 또는 이온이 산소를 얻거나 수소 또는 전자를 '잃는' 것을 말한다.
환원(Reduction)은 분자, 원자 또는 이온이 산소를 잃거나 수소 또는 전자를 '얻는' 것을 말한다.
많은 유기 화학에서의 반응은 산화 상태의 변화로 인한 산화 환원 반응이지만 뚜렷한 전자 이동이 없다. 예를 들어, 산소 분자로 나무를 연소시키는 동안 나무에 있는 탄소 원자의 산화 상태는 증가하고 산소 원자의 산화 상태는 이산화탄소와 물이 형성됨에 따라 감소한다. 산소 원자는 환원되어 전자를 얻고 탄소 원자는 산화되어 전자를 잃는다. 따라서 이 반응에서 산소는 산화제이고 탄소는 환원제이다.

산화 반응은 일반적으로 산소 분자로부터 산화물의 형성과 관련이 있지만 다른 화학종이 동일한 기능을 할 수 있기 때문에 이러한 반응에 산소가 반드시 포함되는 것은 아니다.

산화·환원 반응은 녹 형성에서와 같이 상대적으로 느리게 또는 연료 연소의 경우에서와 같이 훨씬 더 빠르게 발생할 수 있다. 탄소를 산화시켜 이산화탄소(CO2)를 생성하거나 탄소를 수소에 의해 환원시켜 메탄(CH4)을 생성하는 것과 같은 간단한 산화·환원 과정과 인체에서 포도당(C6H12O6)의 산화와 같은 복잡한 과정이 있다. 물의 결합 에너지와 이온화 에너지 분석을 통해 산화·환원 전위를 계산할 수 있다.

출처: 위키백과 검색어 <산화-환원반응>

https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%82%B0%ED%99%94%C2%B7%ED%99%98%EC%9B%90_%EB%B0%98%EC%9D%91

산화·환원 반응 - 위키백과, 우리 모두의 백과사전

2. 적정, 종말점, 당량점에 대해 설명하시오.

2-1. 적정

적정(titration)은 특정 화학종의 농도를 결정하기 위해 사용하는 정량 분석법(quantitative analysis)의 일종으로 적정법(titrimetry)으로도 불린다. 적정에서는 이미 농도를 알고 있는 표준 용액(standard solution)을 이용하여 미지 농도의 용액 속에 존재하는 용질과 완전히 반응시키기 위해 소모된 표준 용액의 양을 측정함으로써 분석물의 농도를 결정한다. 적정법은 산염기 중화 반응, 침전 반응, 산화 환원 반응, 그리고 착물 형성 반응 등을 주로 이용한다. 적정에 필요한 표준 용액의 부피를 측정하는 경우는 부피 적정법(volumetric titrimetry)이라 하며, 부피 대신 시약의 질량을 측정하는 경우는 무게 적정법(gravimetric titrimetry)이라 한다. 전기량 적정법(coulometric titrimetry)은 분석물과 반응하는 데 소모된 전기량을 측정하는 방법이다. 적정법은 빠르고, 편리하고, 정확하므로 일상적인 분석에서 폭넓게 사용된다.
출처 [네이버 지식백과] 적정 [titration] (화학백과)

https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5662943&cid=62802&categoryId=62802

적정

2-2. 종말점

적정실험시 이론 및 계산적으로 구하는 당량점의 도달 여부는 눈으로 확인할 수 없다. 따라서 당량점에 도달했음을 확인하고 적정을 멈추기 위해서는 눈으로 확인할 수 있는 방법을 이용해야 한다. 실제 실험을 통해 실험자가 적정이 완료되었다고 판단하여 적정을 멈추는 지점을 종말점이라고 한다. 중화적정실험의 경우, 적정하는 물질을 조금씩 첨가해 나가다가 페놀프탈레인이나 BTB용액 등의 지시약의 색이 변하는 지점을 종말점이라고 판단할 수 있다. 지시약의 색깔 변화를 이용하는 방법 이외에도 전류·전위차·광도 등의 측정을 통해서 종말점을 구하는 방법도 있다.

종말점과 당량점의 차이가 실험 오차이다. 그러므로 적정 시에는 당량점과 종말점이 가능한 한 가까운 적정실험의 방법을 선택해야 한다.
출처 [네이버 지식백과] 종말점 [end point] (두산백과 두피디아, 두산백과)

https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1275852&cid=40942&categoryId=32251

종말점

2-3. 당량점

어떤 적정에서 적정되는 물질의 성분과 적정하는 성분 사이의 화학량론적 반응이 완결되는 지점을 당량점이라 하고, 이 값은 이론값이므로 실제 적정에서는 이 지점을 알 수가 없다. 따라서 당량점에 관한 정보를 얻기 위하여 지시약을 사용하게 되는데, 적정의 과정에서 지시약의 색이 변해서 적정액의 투입을 중지하는 지점을 종말점이라 한다.

실험시 당량점과 종말점이 반드시 일치하는 것은 아니다. 당량점과 종말점과의 차이가 적정오차인데, 적정에서는 당량점과 종말점이 일치하는 것이 이상적이다. 종말점과 당량점의 차이가 실험값과 이론값의 차이가 되므로, 실험오차가 된다.
출처 [네이버 지식백과] 당량점 [equivalence point] (두산백과 두피디아, 두산백과)

https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1080288&cid=40942&categoryId=32251

당량점

3. 비타민 C를 정량하는 방법 중 DPIP(2,6-dichlorophenolindophenol) 방법에 대해 설명하시오.

찾기 힘들었다.

 

2,6-다이클로로페놀인도페놀(DCPIP 또는 DPIP)은 산화 환원 지시약으로 이용되는 화합물이다.

산화되었을 때는 600 nm에서 최대 흡광을 나타내는 푸른색을 띠고, 환원되었을 때는 무색이다. DCPIP는 광합성 비율을 측정하는 데에 사용될 수 있다. 힐 시약의 일종이다. 광합성 계에서 빛에 노출되었을 때, 이 염료는 화학적 환원에 의해 탈색된다. DCPIP는 페레독신보다 높은 전자 친화도를 가지고, 광합성 전자 전달 연쇄계는 광합성의 일반적인 마지막 전자 전달체 NADP+ 대신 DCPIP를 환원시킬 수 있다. DCPIP가 환원되고 무색이 되면서, 그에 따른 광투과율의 증가는 분광 광도계를 이용하여 측정할 수 있다.
DCPIP는 또한 비타민 C의 지시약으로 사용될 수 있다. 좋은 환원제인 비타민 C가 존재할 때 산성 조건에서 분홍색으로 변하는 푸른색 염색제는 아스코르빈산에 의해 환원되어 무색의 화합물이 된다. 이 반응은 산화 환원 반응으로, 비타민 C(아스코르빈산)은 데하이드로아스코르브산으로 산화되고, DCPIP는 무색의 화합물 DCPIPH2로 환원된다.
DCPIP (푸른색) + H+ → DCPIPH (분홍색)
DCPIPH (분홍색) + 비타민 C → DCPIPH2 (무색)
이 적정에서, 용액의 모든 아스코르브산이 사용되면, DCPIPH를 환원시킬 수 있는 전자가 더 이상 없게 되고 용액은 DCPIPH에 의해 분홍색으로 남아 있게 된다. 모든 DCPIPH를 환원시키기에 아스코르브산이 충분하지 않으면, 종말점은 분홍색이 10초 이상 지속되는 때이다. 약리학적 실험들은 DCPIP가 인간 흑색종의 모형동물 내 인간 암세포를 목표로 하는 화학 요법의 산화 촉진제의 역할을 할 수도 있다고 제안한다. DCPIP 유도 암세포는 세포 내 글루타싸이온 소모와 산화 스트레스의 상향 조절로 세포사가 일어난다.

출처: 위키백과 검색어 <다이클로로페놀인도페놀>, <Dichlorophenolindophenol>

https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%8B%A4%EC%9D%B4%ED%81%B4%EB%A1%9C%EB%A1%9C%ED%8E%98%EB%86%80%EC%9D%B8%EB%8F%84%ED%8E%98%EB%86%80

다이클로로페놀인도페놀 - 위키백과, 우리 모두의 백과사전

 

4. DPIP 적정법 외에 비타민 C를 정량하는 방법 중 DNP method (2,4-dinitrophenyl hydrazine 비색법)에 대해 설명하시오.

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결합 순서의 결정에 활용되었다. 디니트로페닐 단백질, 디니트로페닐펩티드를 염산으로 가수 분해할 때, 디니트로페닐기가 도입된 아미노산은 현저한 분해를 받는 일 없이 분리할 수 있으므로, N-디니트로페닐아미노산을 정성 및 정량 분석함으로써 단백질의 N 말단기의 결정 및 단백질 중에 포함된 폴리펩티드 사슬의 수를 구할 수 있다. 또 부분적으로 가수 분해하면 약간의 디니트로페닐펩티드가 얻어지므로 이들의 구조를 결정하면 N 말단 펩티드의 아미노산의 결합 순서를 결정할 수 있다.

조작법
디니트로페닐 단백질을 염산으로 가수 분해한 후 적당량의 물로 묽게 하고, 에테르로 디니프로페닐아미노산을 추출한다. 만일 N 말단기가 히스티딘 또는 아르기닌일 경우이면 디니트로페닐 유도체로 전자의 일부, 또는 후자의 전부가 물층에 남는다. 에테르로 추출된 디니트로페닐아미노산은 보통 톨루엔-에틸렌클로로히드린-피리딘-0.8N 암모니아수(100 : 60 : 35 : 60) 및 1.5~2.0M 인산나트륨(pH 5.0~6.0)을 사용하여 2차원 종이 크로마토그래피로 분리하고, 황색 반점 위치에서 확인, 거름종이에서 물 또는 1% 탄산수소나트륨 용액으로 디니트로페닐아미노산을 추출, 360mμ의 흡수 측정에 의해 정량, 분석을 한다.

물층 중에 녹아 있는 디니트로페닐아미노산은 pH 6의 프탈산 완충액으로 처리한 거름종이를 사용하고 이 완충액으로 포화시킨 삼차 아미노알코올을 용매로 하여 분리한다. 그러나 염산 가수 분해시에 디니트로페닐아미노산은 약간 분해되고, 그 분해 정도는 각 아미노산에 따라 또 동시에 존재하는 단백질 종류에 따라 다르다. 분해율이 큰 아미노산에 대해서는 말단 아미노산 잔기를 참조. 이 방법은 단백질 가수 분해물에 직접 적용하면 간편하게 조성 아미노산을 정량할 수 있다.

출처
[네이버 지식백과] 디니트로페닐법(디나이트로페닐법) [dinitrophenyl method, Dinitrophenylmethode] (화학대사전, 2001. 5. 20., 세화 편집부)

https://terms.naver.com/entry.naver?docId=2282369&cid=60227&categoryId=60227

디니트로페닐법(디나이트로페닐법)

 

5. DPIP 적정법 외에 비타민 C를 정량하는 방법 중 아이오딘 적정법에 대해 설명하시오.

5-1.

아이오딘적정에는 약한 산화제인 아이오딘의 표준용액을 이용하여 강한 환원제를 산화시키는 아이오딘산화적정과, 산화제를 환원시켜 아이오딘을 석출시킨 다음 이것을 싸이오황산나트륨 표준용액을 써서 적정하는 아이오딘환원적정의 두 가지가 있다. 산화적정에서는 아이오딘의 약한 산화력을 이용하여 환원성 물질을 정량한다. 즉,
I2＋2e -→ 2I-
의 반응을 이용하며, 지시약으로는 녹말 ·클로로폼 등을 쓴다. 아이오딘은 물에 잘 녹지 않기 때문에 표준 아이오딘화칼륨 수용액을 이용한다.
이 적정은 비소·아비산·감홍(甘汞:염화수은) 등을 정량하는 데 쓰인다. 또한 환원적정에서는 산화제가 들어 있는 시료에 과잉의 아이오딘화칼륨을 포함한 용액을 첨가하여 아이오딘을 석출시킨 후, 이것을 표준 싸이오황산나트륨 용액을 써서 적정한다.
I2+2Na2S2O3 → 2NaI+Na2S4O6
지시약으로는 녹말이나 클로로폼을 쓰며, 빛깔이 없어지는 순간을 종점으로 정한다. 이 적정은 할로젠화합물·과산화물 등의 여러 가지 물질을 정량하는 데 이용된다.
출처
[네이버 지식백과] 아이오딘적정 [iodometry] (두산백과 두피디아, 두산백과)

https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1129913&cid=40942&categoryId=32255

아이오딘적정

5-2.

요오드의 산화작용 또는 요오드화물 이온의 환원작용을 이용하는 적정의 총칭. 전자를 요오드 산화적정(직접 적정), 후자를 요오드 환원적정(간접 적정)이라 하기도 한다. 산화적정에서는 요오드의 약한 산화력을 이용하여 환원성 물질을 정량한다. 지시약으로는 녹말·클로로포름 등을 쓴다. 요오드는 물에 잘 녹지 않기 때문에 표준 요오드화 칼륨 수용액을 이용한다. 이 적정은 비소·아비산·감홍(甘汞 : 염화수은) 등을 정량하는 데 쓰인다. 또한 환원 적정에서는 산화제가 들어 있는 시료에 과잉의 요오드화 칼륨을 포함한 용액을 첨가하여 요오드를 석출시킨 후, 이것을 표준 티오황산나트륨 용액을 써서 적정한다. 지시약으로는 녹말이나 클로로포름을 쓰며, 빛깔이 없어지는 순간을 종점으로 정한다. 이 적정은 할로겐 화합물·과산화물 등의 여러 가지 물질을 정량하는 데 이용된다.
출처
[네이버 지식백과] 요오드 적정(아이오딘 적정) [iodimetry, iodometry] (화학용어사전)

https://terms.naver.com/entry.naver?docId=608277&cid=42420&categoryId=42420

요오드 적정(아이오딘 적정)

 

6. 비타민 C의 화학적 특징에 대해 설명하시오.

비타민 C

비타민 C는 L-아스코르브산(L-ascorbic acid, Asc)이라고 부르기도 한다. 아스코르브산의 pKa1 = 4.17이고, pKa2 = 11.57로 식초보다 조금 더 산성이 강한 물질이다. 4개의 알코올기를 가진 비타민 C는 수용성이다.

비타민 C는 거의 모든 과일과 채소에 들어있는 비타민의 중의 하나이고, 비타민 C 합성 효소를 가지고 있는 육식 동물은 자체적으로 체내에서 이것을 합성하기 때문에 채소와 과일을 먹지 않아도 되지만, 합성하지 못하는 동물은 반드시 섭취해야 한다. 인간은 비타민 C 합성 효소를 가지고 있지 않기 때문에 음식으로 섭취해야 하는 필수 비타민의 한 종류이다. 비타민 C가 결핍되면 괴혈병을 일으키는데, 과거에 그 이유를 모르고 장기 항해를 하는 선원들이 신선한 채소와 과일로부터 충분한 비타민 C를 섭취하지 못하여 괴혈병으로 사망하는 사례가 많았다.

비타민 C는 강력한 환원제로써 항산화 작용이 있고, 콜라젠 합성 효소와 생물의 에너지 대사과정에 관여하는 다양한 효소의 보조 효소이다. 비타민 C는 열에 약하기 때문에 약 70도 이상의 열을 가하면 비타민 C의 5각형 구조가 깨진다. 따라서 신선한 채소와 과일을 가열하지 않고 날것으로 먹어야 비타민 C를 파괴하지 않고 섭취할 수 있다.

비타민 C의 pKa 비교 및 항산화 작용

비타민 C에는 4개의 -OH 작용기를 가지고 있다. 이들 중에서 탄소 2번과 3번에 연결된 -OH 작용기의 산성도가 가장 강하다. 이들의 pKa 값은 각각 pKa2 = 11.57(탄소 2번 -OH)과 pKa1 = 4.17(탄소 3번 -OH)이다. 2번 탄소에 있는 -OH보다 3번 탄소에 있는 -OH가 약 107배 만큼 더 큰 산성을 보인다. 이는 3번 탄소의 -OH에서 H+ 가 해리되고 생겨난 짝염기의 공명 구조 개수와 3번 탄소의 -OH에서 H+ 가 해리되고 생겨난 짝염기의 공명 구조 개수를 비교하여 설명할 수 있다. 즉, 3번 탄소의 -OH에서 H+가 해리되고 생겨난 짝염기의 공명 구조 개수는 3개이고, 2번 탄소의 -OH에서 H+가 해리되고 생겨난 짝염기의 공명 구조 개수는 2개이다. 공명 혼성체 개수가 많다는 것은 전자의 비편재화(delocalization)가 더 넓은 곳에서 나타나고 이는 곧 화합물의 에너지를 낮추는 결과를 낳는다. 즉, 2번 탄소의 -OH에서 H+가 해리되고 생겨난 짝염기는 3개 원자 사이에 전자가 배치되어 있지만, 3번 탄소의 -OH에서 H+가 해리되고 생겨난 짝염기는 5개 원자에 전자가 배치되어 있어 비편재화가 더 많은 형태이므로 더 안정한 형태가 되어 pKa값이 상대적으로 더 작은 값을 가져 더 산성이 된다.

비타민 C의 항산화 작용은 생리활성에서 발생하는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROSs) 또는 활성 질소종(reactive nitrogen species, RNSs)을 소거하는 능력에서 발생한다. 활성 산소종과 활성 질소종은 반응성이 매우 큰 생리활성 중간체로, 이들이 발생하면 이웃에 존재하는 지질, 단백질, 핵산 등 여러 가지 생분자들을 산화시킬 수 있다. 이러한 산화의 부작용은 노화, 암, 당뇨 등과 같은 다양한 질병의 원인이 된다.

비타민 C는 수용액 상태에서 3번 탄소에 붙어 있는 -OH가 이온화되어 산소 음이온으로 존재한다. 생리 과정에서 발생한 활성 산소종과 활성 질소종이 비타민 C에 이웃하면 이들은 비타민 C의 2번 탄소에 존재하는 수소를 떼어내고 비타민 C에 라디칼을 남겨 놓는다. 비타민 C에 생성된 라디칼은 공명 구조를 통해 안정화되거나, 전자가 1개 더 떨어진 후 탈수소아스코베이트(dehydroascorbate)를 형성하여 안정화된다. 이렇게 반응성이 큰 활성 산소종과 활성 질소종 라디칼을 안정한 비타민 C 라디칼 중간체로 변화시켜 라디칼을 소거하는 항산화 작용을 진행한다.
출처: [네이버 지식백과]비타민 C [vitamin C] (화학백과)

https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5663193&cid=62802&categoryId=62802

비타민 C

 

7. [기구와 시약] 위 시약들의 물리적, 화학적 특성과 그 위험성에 대해 조사하시오. (원자량, 녹는점, 끓는점 포함)

* 기구
뷰렛(50 mL), 스탠드, 클램프, 깔대기, 삼각플라스크(100 mL, 2개), 메스실린더(10 mL, 2개), 부피플라스크(100 mL, 2개), 비커(100 mL), 스포이드

 

* 시약
- DPIP (2,6-dichlorophenolindophenol) C12H6Cl2NO2Na (MW 290.1 g/mol)
- 비타민 C (L-Ascorbic acid) (MW 176.13 g/mol), 비타 500
- 옥살산 (oxalic acid)(MW 90.03 g/mol)

7-1. DPIP (2,6-dichlorophenolindophenol)

분자식: C12H6Cl2NO2Na
분자량: 290.1 g/mol
CAS 번호: 620-45-1
물리적 특성:
녹는점: 약 250°C
끓는점: 데이터 없음
화학적 특성:
DPIP는 화학 시약으로, 화학 실험 및 분석에서 산화환원 반응에 사용됩니다. 화학실험에서 화학의 산화력을 측정하는 데 사용될 수 있습니다.
위험성:
DPIP는 산화제이며, 눈과 피부에 자극을 일으킬 수 있습니다. 안전 조치 및 개인 보호 장비를 사용해 다루어야 합니다.

7-2.  비타민 C (L-Ascorbic Acid)

분자식: C6H8O6
분자량: 176.13 g/mol
CAS 번호: 50-81-7
물리적 특성:
녹는점: 약 190-192°C
끓는점: 데이터 없음 (분해됨)
화학적 특성:
비타민 C는 항산화 작용을 하는 비타민으로 알려져 있으며, 건강에 많은 이점이 있는데, 주로 음식 보존제 또는 건강 보충제로 사용됩니다.
위험성:
비타민 C는 일반적으로 안전하며, 대부분의 사람들이 정상적으로 복용할 수 있습니다. 그러나 과도한 복용은 설사 및 소화 문제를 일으킬 수 있습니다.

7-3.   옥살산 (Oxalic Acid)

분자식: C2H2O4
분자량: 90.03 g/mol
CAS 번호: 144-62-7
물리적 특성:
녹는점: 약 365°C (분해됨)
끓는점: 데이터 없음 (분해됨)
화학적 특성:
옥살산은 강산성을 가진 이산화탄소의 이중 염기입니다. 천연으로 산출되며, 주로 화학 실험 및 산업 프로세스에서 사용됩니다.
위험성:
옥살산은 독성이 있을 수 있으며, 흡입, 피부 접촉 또는 삼킬 경우 유독할 수 있습니다. 적절한 안전 조치 및 개인 보호 장비를 사용하여 다루어야 합니다.
각 시약에 대한 화학적 및 물리적 특성을 고려하여 안전 조치를 취하고, 화학 시약을 다룰 때 적절한 랩 안전 절차를 준수해야 합니다. 또한 해당 규정 및 지침을 준수하여 시약을 다루는 것이 중요합니다.

출처 : MSDS 검색후 요약, 검색어 <2,6-디클로로인도페놀 나트륨 염>,<L-아스코르빈 산>,<옥살산>

https://msds.kosha.or.kr/MSDSInfo/kcic/msdssearchMsds.do

안전보건공단 화학물질정보 | MSDS검색

 

8.[실험 방법]실험의 간략한 과정은 다음과 같다. 

이때 비타민 C를 옥살산에 녹이는 이유를 간단히 서술하시오.

실험1. 비타민 C 표준용액으로 Dye 표준용액의 적정
1) Oxalic acid 1.018g을 증류수로 녹여 비커에 Oxalic acid 수용액 (1%) 100 mL를 제조한다.
2) DPIP 와 비타민 C 표준용액을 준비 한다.
① 비타민 C 표준용액 : Ascorbic acid 0.01 g 을 측정하여 100 mL 부피플라스크에 1)에서 만든 1% oxalic acid로 녹인다.
② DPIP 표준용액 : 후드에 준비된 DPIP 표준용액을 100 mL 비커에 30 mL 취해온다. (DPIP 용액의 농도 : 0.038 g/ 100 mL)
3) 깔때기를 이용하여 비타민 C 표준용액 약 5 mL를 이용해 뷰렛을 씻은 후 비타민 C 표준용액으로 뷰렛을 채운다.
4) 메스실린더에 DPIP 표준용액 5.00 mL을 정확히 측정하여 100ml 삼각 플라스크에 넣는다.
※ DPIP 표준용액의 양이 정확하지 않으면 오차가 커지므로 주의하세요!!
5) 삼각플라스크 밑에 흰 종이를 깔고 적정을 시작한다.
6) DPIP의 색이 파란색에서 붉은 색을 거쳐 투명하게 변하는데, 이때가 종말점이다.
7) 위 실험을 반복한다. (총 3회)

 

실험2. 비타 500에 들어있는 비타민 C 정량 분석
1) 비타 500 용액 제조: 비타 500 4 mL를 100 mL 부피플라스크에 넣고 증류수로 100 mL까지 묽힌다.
2) 깔때기를 이용하여 이용하여 1)의 비타 500 용액 약 5 mL를 이용해 뷰렛을 씻은 후 뷰렛에 채운다.
3) 메스실린더로 DPIP 표준용액 5.00 mL을 정확히 측정하여 100 mL삼각플라스크에 넣는다.
4) 삼각플라스크 밑에 흰 종이를 깔고 적정을 시작한다
5) 용액의 색이 파란색에서 붉은 색을 거쳐 연한 노란색으로 변하는데, 이 때가 종말점이다.
6) 위 실험을 반복한다.(총 3회)

8-A.

상온에 방치해두면 이수화물로 되는데 바로 이수화물을 순수하게 얻을 수 있다.
이러한 성질 때문에 옥살산은 산 ·알칼리적정 및 산화환원적정 등에 표준물질로 쓰인다.
좀더 자세히 말하자면
비타민의 산화 형식전위는 pH에 심하게 의존하는데 pH=0 부근에서 -0.39V정도를 나타내고, pH가 pK2이상이 되면 알짜 반응에서 양성자가 관여하지 않기 때문에 전위가 pH와 무관하게 된다. 결국 산성 환경에서 비타민 C의 반응성이 높아짐을 알 수 있다. 하지만 황산, 질산 등의 다른 강산들은 음이온이 그 자체로 환원제로 작용할 수 있기 때문에 약산인 옥살산을 사용한다. 결국 산화 방지를 방지하기위해 옥살산에 녹인다.